TIANSeq直接快速DNA文庫(kù)構(gòu)建試劑盒（IIIumina）（NG101）
品牌：TIANGEN
貨號(hào)：NG101
規(guī)格：/品牌：TIANGEN
貨號(hào)：NG101
規(guī)格：/產(chǎn)品簡(jiǎn)介
TIANSeq DirectFast Library Kit(Illumina) 是專(zhuān)門(mén)針對(duì)于Illumina 高通量測(cè)序平臺(tái)所優(yōu)化的 DNA 文庫(kù)構(gòu)建試劑盒。本試劑盒實(shí)現(xiàn)了 DNA 片段化、末端修復(fù)和 3’端 dA 尾添加在一管內(nèi)一步法完成，同時(shí)所得產(chǎn)物無(wú)需純化，可直接用于 adapter 的連接。另外，本試劑盒配備的 PCR 擴(kuò)增試劑經(jīng)過(guò)專(zhuān)門(mén)的優(yōu)化，擴(kuò)增所得 DNA 序列產(chǎn)量高，保真度好、無(wú)堿基偏好性。本產(chǎn)品采用一步法的反應(yīng)流程，省去了多步純化步驟，整個(gè)建庫(kù)流程僅需 2.5 hr；文庫(kù)轉(zhuǎn)化效率更高，可對(duì)微量 DNA 樣本進(jìn)行高效的文庫(kù)構(gòu)建。
主要特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)
■ DNA 片段化過(guò)程和 PCR 富集過(guò)程無(wú)明顯堿基偏好性，測(cè)序均一度好。
■ 高文庫(kù)轉(zhuǎn)化效率， DNA 樣本起始量可低至 1 ng。
■ 一管式酶促反應(yīng)，操作簡(jiǎn)便，省去多步純化步驟，整個(gè)建庫(kù)流程僅需 2.5 hr。
應(yīng)用
適用于 Illumina 高通量測(cè)序平臺(tái) DNA 文庫(kù)構(gòu)建
文庫(kù)構(gòu)建流程
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
靈活的上樣量和片段處理長(zhǎng)度
圖1. 不同反應(yīng)時(shí)間對(duì)DNA 片段化效果
使用“TIANSeq DirectFast DNA Library Prep Kit” 對(duì)10 ng 和1000 ng DNA 進(jìn)行片段化處理。處理不同時(shí)長(zhǎng)的反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)1.8× 磁珠進(jìn)行純化后用于Angilent 2100 分析。
片段化酶與機(jī)械片段化效果比較
圖2. 不同文庫(kù)制備方案基因組覆蓋的對(duì)比結(jié)果，三種不同GC 含量細(xì)菌基因組DNA 等摩爾混合，100 ng 混合DNA 經(jīng)不同方案制備文庫(kù)測(cè)序后比較基因組覆蓋度。結(jié)果表明：FEA Module（NG301) 對(duì)DNA 的片段化效果與超聲破碎高度一致，均不存在堿基偏好性。
樣本低至1ng建庫(kù)效果比較
圖3. 不同文庫(kù)制備方案基因組覆蓋的對(duì)比結(jié)果，三種不同GC 含量細(xì)菌基因組DNA 等摩爾混合，1 ng 混合DNA 經(jīng)不同方案制備文庫(kù)測(cè)序后比較基因組覆蓋度。結(jié)果表明：即使低至1 ng 的DNA 上樣量，F(xiàn)EA Module（NG301) 的片段化效果仍然與 超聲破碎方法高度一致，沒(méi)有堿基偏好性。
采用PCR free步驟測(cè)序結(jié)果比較
圖4. 不同初始量的基因組DNA 使用PCR 或PCR free 的方式進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建，*終的基因組覆蓋對(duì)比對(duì)。結(jié)果表明：使用Fragmentation Module (NG301)試劑及一管式操作和高效的文庫(kù)構(gòu)建步驟，無(wú)論是否進(jìn)行PCR 富集，所得到的DNA 文庫(kù)在片段覆蓋度分布方面均與機(jī)械破碎方法保持高度一致。
文庫(kù)構(gòu)建效率與得率統(tǒng)計(jì)
圖5. 不同起始量樣本(1、10、25、50、100、500、1000 ng) 進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建后，使用qPCR 對(duì)得到的文庫(kù)DNA 進(jìn)行定量分析結(jié)果。線(xiàn)性回歸分析表明在廣泛的上樣量范圍內(nèi)，文庫(kù)得率均呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。即使在上樣量低至1 ng 的情況下，文庫(kù)構(gòu)建效率也不會(huì)降低。
